Trametes versicolor, sidenticka, producerar flera olika isoformer av lackas, ett glykosylerat koppar-innehållande enzym bestående av ~500 aminosyrarester och med en molekylvikt på ca 65 kDa. Lackas oxiderar många olika föreningar, men huvudsakligen fenoler. Potentiella användningsområden för lackas inkluderar konstruktion av biosensorer, detoxifiering av fenoler och biologisk blekning av pappersmassa. Lackas – katalyserad oxidation av Hibbert ketoner, guaiacylpropan-derivat som uppkommer då lignin bryts ned i närvaro av syra, undersöktes med UV-VIS spektroskopi, TLC, GPC och LC-MS. Tre olika Hibbert ketoner (1- (4-hydroxi-3-metoxifenyl)-2-propanon, 1- (4-hydroxi-3-metoxifenyl)-1,2-propandion och 2-hydroxi-1- (4-hydroxi-3-metoxifenyl)-1-propanon) undersöktes och alla tre visade sig vara substrat för lackas från T. versicolor. Bildning av produkter som absorberde vid samma våglängd som substratet försvårade bestämningar av reaktionshastigheten med UV-VIS spektroskopi jämfört med LC-metoden. GPC analyserna tyder på att produktbildningen huvudsakligen är en omlagring på monomer-nivå snarare än en polymerisering. Lcc1 och lcc2, två cDNA som kodar för två olika isoenzymer av T. versicolor lackas klonades in i vektorn pGAPZ för expression i Pichia pastoris. Expressionen kontrollerades av P. pastoris GAP promotor. Plasmid-konstruktionerna fördes in i P. Pastoris genom elektroporering och transformanter valdes ut på agarplattor innehållande 50 och 100 mg/ml zeocin. Transformanterna fördes över till plattor innehållande ABTS som vid reaktion med lackas bildar en radikal som absorberar i det synliga våglängdsområdet. En större andel av de transformanter som innehöll lcc2 gav upphov till en intensiv färg i jämförelse med de transformanter som innehöll lcc1 (~10 % för lcc1 och ~25 % för lcc2). Plattor med högre koncentration zeocin gav transformanter med högre lackasaktivitet. Detta tyder på att det skett multipla insättningar av expressionskassetten i genomet hos P. pastoris.

Trametes versicolor produces several isoforms of laccase, which is a glycosylated copper-containing extracellular protein that consists of ~500 amino-acid residues and has a molecular weight of 65 kDa. Laccase oxidizes a wide range of compounds, primarily phenols. The diverse applications attributed to laccase include the construction of biosensors, detoxification as well as are delignification and biobleaching of pulp. Laccase–catalyzed oxidation of Hibbert ketones, guaiacylpropane derivatives obtained by acid degradation of lignin, was examined using UV-VIS spectroscopy, TLC, GPC and LC-MS. Three different Hibbert ketones were studied, namely 1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propanone, 1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,2-propanedione and 2-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-propanone. All three Hibbert ketones tested were found to serve as substrates for T. versicolor laccase. Interference by products absorbing at the wavelengths used for quantification of the substrates made determination of the reaction rates using UV-VIS spectroscopy difficult compared with the LC method. GPC analyses suggested product formation by rearrangements at the monomer level rather than polymerization._x000B_Two cDNAs, lcc1 and lcc2, encoding different T. versicolor laccase isoenzymes were cloned in the Pichia pastoris expression vector pGAP Z under the control of the P. pastoris GAP promoter.The resulting plasmids were introduced into P. pastoris through electroporation and selected by using agar plates containing 50 and 100 mg/ml zeocin. The transformants were transferred from YPDS plates to agar plates containing ABTS, a chromogenic substrate for laccase. Transformants containing lcc2 gave rise to a more intense color than transformants with lcc1. In addition, a larger fraction of the lcc2 transformants produced detectable laccase activity compared with the lcc1 transformants (~10 % for lcc1 and ~25 % for lcc2). Transformants collected from plates with a higher concentration of zeocin showed higher laccase activity. This was probably due to the insertion of several copies of the expression cassette into the genome.