Hög kolesterolhalt i kroppen kan leda till hjärt- och kärlsjukdomar. Ett sätt att minska kroppens kolesterolnivå kan vara att öka gallsyraproduktionen, eftersom gallsyror bildas från kolesterol. Ett bra sätt att bedöma omfattningen av gallsyrasyntesen är att analysera 7a-hydroxy-4-cholesten-3-one (C4), som är den intermediär som bildas efter det hastighetsbestämmande steget i syntesen. Två upparbetningsmetoder utvecklades för C4 i plasma. En metod utfördes med fastfas extraktion där C18 SPE-kolonner användes. Kolonnen aktiverades och konditionerades med metanol och H2O. Provet satsades på kolonnen, som sedan tvättades med H2O. C4 eluerades slutligen ut med metanol/metyl-tert-butyl-eter (2:1). Den andra metoden var en proteinfällningsmetod, som utfördes i 96-håls platta. Proteinerna fälldes där ut med hjälp av isopropanol/etylacetat, och vätskefasen kunde efter ultraljudsbad och centrifugering överföras till en ny platta. Tre analysmetoder för HPLC har också utvecklats, för detektion med UV eller MS. Kromatografisk separation av C4 och en tänkbar intern standard har för detektion med UV utvärderats på dels ett normal fas-system (NP-system) med en LiChroCART kolonn och dels ett omvänd fas-system (RP-system) med en Extend-C18 kolonn. För MS-detektion användes ett RP-system med en C16 Amide kolonn. Fastfas extraktion gav endast ett högt utbyte då 100ul plasma eller mer användes. Vid mindre volymer eller vid upparbetning av många prov var proteinfällningsmetoden fördelaktigast att använda. Vid analys på HPLC gav systemet med MS-detektor lägst detektionsgräns. Systemet med NP-kolonn gav bättre kromatografi än RP-kolonnen då UV detektor användes.

High cholesterol levels in the body can lead to cardiovascular diseases. One way to lower the cholesterol levels in the body can be to increase bile acid production, since bile acids are synthesized from cholesterol. A good way to estimate the production rate of bile acids is to analyse 7a-hydroxy-4-cholesten-3-one (C4), which is the intermediate that is produced after the rate limiting step in the bile acid synthesis. Two sample preparation methods were developed for C4 in plasma. One method was based on solid-phase extraction, where C18 SPE columns were used. The column was activated and conditioned with MeOH and H2O. Then the sample was applied on the column, and washed with H2O. C4 was finally eluated with MeOH/MtBE (2:1). The second method was a protein precipitation method, which was performed in a 96-well plate. The proteins were precipitated with isopropanol/ethyl acetate, and the liquid phase transferred to a new plate after ultrasonic bath and centrifugation. Three methods for HPLC-analysis have also been developed, for UV or MS detection. Chromatographic separations of C4 and a possible internal standard were, for UV detection, evaluated on a normal phase system (NP-system), with a LiChroCART column, and a reversed phase system (RP-system), with an Extend C18 column. For detection with MS, an RP-system with a C16 Amide column was used. Solid-phase extraction only gave a high recovery when 100ml plasma or more was used. With smaller volumes or with preparation of many samples the protein precipitation method was better to use. The system with MS-detection gave the lowest detection limit. The system with the NP-column gave better chromatography than the system with RP-column, when UV-detection was used.