Change search
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf
Development and Validation of a Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Method for Determination of Cyclosporine A in Whole Blood
Karlstad University, Division for Chemistry.
2009 (English)Independent thesis Advanced level (degree of Master (One Year)), 20 credits / 30 HE creditsStudent thesis
Abstract [sv]

Cyklosporin A (CsA) är en cyklisk polypeptid med molekylvikten är 1202.6 Da. Substansen har svampursprung (Tolypocladium inflatum Gams) och starka immunhämmande egenskaper. CsA används därför som immunsuppressivt läkemedel för att förhindra avstötning av transplanterade organ och benmärg, samt vid behandling av graft-versus-host-disease (transplantat-mot-värd-sjukdom). CsA har ett snävt terapeutiskt fönster, vilket betyder att skillnaden mellan effektivitet och toxicitet är liten. Biverkningarna av substansen är många och en del av dem allvarliga, såsom nedsatt njurfunktion och ökad risk för utvecklande av diabetes och maligna sjukdomar som exempelvis lymfom. Den inter- och intraindividuella variabiliteten i farmakokinetik och farmakodynamik är dessutom stor. Det är därför ytterst viktigt att följa behandlingen med koncentrationsbestämningar av CsA i helblod.

Det finns ett flertal olika analysmetoder för CsA tillgängliga, såsom immunoassays, vätskekromatografi (HPLC) och vätskekromatografi-tandem-massspektrometri (LC-MS/MS). Avdelningen för klinisk kemi vid Centralsjukhuset i Karlstad har sedan många år använt en radioimmunoassay, CYCLO-Trac SP®, från DiaSorin för att bestämma CsA i helblod. Laboratoriets önskan är att ersätta denna metod, vilken använder radioaktiva isotoper, med en snabbare och mer selektiv LC-MS/MS-metod. 

I detta arbete har en LC-MS/MS-metod för analys av cyklosporin A i helblod utvecklats och validerats. Metoden har snabb provupparbetning och kromatografi och använder positiv elektrospray som joniseringsteknik. Två procedurer för proteinfällning utvärderades som provupparbetningsförfarande under metodutvecklingen och två olika internstandarder testades; CsA analogen cyklosporin D och isotopmärkt CsA (d12-CsA). 

Efter den fullständiga valideringen infördes metoden i rutinarbetet 2009-11-01. Resultat från både LC-MS/MS och den radioimmunologiska metoden lämnas ut parallellt under minst fem månader.

Abstract [en]

Cyclosporine A (CsA) is a cyclic undecapolypeptide of fungal origin (Tolypocladium inflatum Gams). It has a molecular weight of 1202.6 Da and is used as an immunouppressive drug to prevent rejection of transplanted organs and bone marrow, and for the treatment of graft-versus-host disease. CsA exhibits a narrow therapeutic range between efficacy and toxicity. There are many side effects exerted by the drug and some of them are serious, such as renal dysfunction and increased risk of developing diabetes and malignant diseases such as lymphoma. In addition, the inter-individual and intra-individual pharmacokinetic and pharmacodynamic variability is large. Constant monitoring of the CsA-concentration is therefore mandatory. 

There are several analytical methods available for the determination of CsA, such as immunoassays, liquid chromatography (HPLC) and tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The department of Clinical Chemistry at the Central Hospital in Karlstad has for many years used a radioimmunoassay, the CYCLO-Trac SP® from DiaSorin, for CsA-determinations. The laboratory wants to replace this method, which uses radioactive isotopes, with a faster and more selective LC-MS/MS method. 

In this work a LC-MS/MS method, utilizing positive electrospray, with a fast sample preparation and chromatography for the determination of CsA in whole blood has been developed and validated. Two protein precipitation procedures were evaluated for sample preparation during the method development and two different internal standards were tested; the CsA analog cyclosporine D (CsD) and an isotope labelled CsA (d12-CsA). The LC-MS/MS assay was fully validated and implemented in the routine work at the laboratory on November 1 2009. Results from both the CYCLO-Trac SP® method and the LC-MS/MS assay will be reported for at least five months.

Place, publisher, year, edition, pages
2009. , p. 71
National Category
Analytical Chemistry
Identifiers
URN: urn:nbn:se:kau:diva-5511OAI: oai:DiVA.org:kau-5511DiVA, id: diva2:306817
Presentation
(English)
Uppsok
Physics, Chemistry, Mathematics
Supervisors
Examiners
Available from: 2010-06-14 Created: 2010-03-31 Last updated: 2010-06-14Bibliographically approved

Open Access in DiVA

fulltext(823 kB)2265 downloads
File information
File name FULLTEXT01.pdfFile size 823 kBChecksum SHA-512
82be5fec68be9ad7a9cb811af8c014dac205d70cb37378d0d28a67b5d192ef8223a7242f1fc30139ee58c0e9330d0e88e66db286f0b8d2dc4c493c5782d7f70f
Type fulltextMimetype application/pdf

By organisation
Division for Chemistry
Analytical Chemistry

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar
Total: 2265 downloads
The number of downloads is the sum of all downloads of full texts. It may include eg previous versions that are now no longer available

urn-nbn

Altmetric score

urn-nbn
Total: 525 hits
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf